सेल संस्कृति प्रदूषण प्रभावकारी रूपमा कम गरिएको थियो

सेल संस्कृतिहरूको प्रदूषण सजिलै सेल संस्कृति प्रयोगशालाहरूमा सबैभन्दा सामान्य समस्या बन्न सक्छ, कहिलेकाहीँ धेरै गम्भीर परिणामहरू निम्त्याउँछ।सेल कल्चर प्रदूषकहरूलाई दुई भागमा विभाजन गर्न सकिन्छ, रासायनिक दूषित पदार्थहरू जस्तै मध्यम, सीरम र पानीको अशुद्धता, एन्डोटोक्सिन, प्लाष्टिसाइजर र डिटर्जेन्टहरू, र जैविक दूषित पदार्थहरू जस्तै ब्याक्टेरिया, मोल्ड, यीस्ट, भाइरस, माइकोप्लाज्मा क्रस संक्रमण।अन्य सेल लाइनहरु द्वारा दूषित।यद्यपि यो प्रदूषणलाई पूर्ण रूपमा हटाउन असम्भव छ, यसको स्रोतलाई राम्ररी बुझेर र राम्रो एसेप्टिक प्रविधिहरू अनुसरण गरेर यसको आवृत्ति र गम्भीरता कम गर्न सकिन्छ।

1. यो खण्डले जैविक प्रदूषणका मुख्य प्रकारहरूलाई रूपरेखा दिन्छ:
ब्याक्टेरियल प्रदूषण
मोल्ड र भाइरस प्रदूषण
माइकोप्लाज्मा प्रदूषण
खमीर प्रदूषण

1.1 ब्याक्टेरियल प्रदूषण
ब्याक्टेरिया सर्वव्यापी एकल-कोशिका सूक्ष्मजीवहरूको ठूलो समूह हो।तिनीहरू सामान्यतया व्यासमा केही माइक्रोन हुन्छन् र विभिन्न आकारहरूमा आउन सक्छन्, गोलाकारहरूबाट रडहरू र सर्पिलहरूमा।तिनीहरूको सर्वव्यापीता, आकार, र द्रुत वृद्धि दरको कारण, ब्याक्टेरिया, खमीर र मोल्डहरू सहित, सेल संस्कृतिमा सबैभन्दा सामान्य जैविक प्रदूषकहरू हुन्।

1.1.1 ब्याक्टेरियल दूषितता पत्ता लगाउने
ब्याक्टेरियाको दूषितता संक्रमित भएको केही दिन भित्र संस्कृतिको दृश्य निरीक्षणद्वारा सजिलै पत्ता लगाउन सकिन्छ;
संक्रमित संस्कृतिहरू सामान्यतया बादल (अर्थात, टर्बिड) देखिन्छन्, कहिलेकाहीँ सतहमा पातलो फिल्मको साथ।
संस्कृति माध्यमको pH मा अचानक ड्रपहरू पनि प्रायः सामना गरिन्छ।
कम-शक्ति माइक्रोस्कोप अन्तर्गत, ब्याक्टेरियाहरू सानो, कोशिकाहरू बीचको कणहरू जस्तै देखिन्छन्, र उच्च-शक्ति माइक्रोस्कोप अन्तर्गत अवलोकनले व्यक्तिगत ब्याक्टेरियाको आकारहरू समाधान गर्न सक्छ।

1.2 मोल्ड र भाइरस प्रदूषण
१.२.१ मोल्ड प्रदूषण
मोल्डहरू फंगल साम्राज्यका युकेरियोटिक सूक्ष्मजीवहरू हुन् जुन हाइफे भनिने बहुकोशिकीय फिलामेन्टहरूको रूपमा बढ्छ।यी बहुकोशिकीय फिलामेन्टहरूको कनेक्टिभ नेटवर्कहरूमा आनुवंशिक रूपमा समान न्यूक्लीहरू हुन्छन् जसलाई उपनिवेश वा माइसेलियम भनिन्छ।

खमीर प्रदूषण जस्तै, कल्चरको pH दूषित हुने प्रारम्भिक चरणमा स्थिर रहन्छ र त्यसपछि तीव्र रूपमा बढ्छ किनभने संस्कृति अधिक गम्भीर रूपमा संक्रमित हुन्छ र बादल हुन्छ।माइक्रोस्कोप अन्तर्गत, माइसेलियम सामान्यतया फिलामेन्टस हुन्छ, कहिलेकाहीँ बीजाणुहरूको बाक्लो समूहको रूपमा।धेरै मोल्डहरूका बीजाणुहरू तिनीहरूको सुप्त अवस्थाको समयमा अत्यन्त कठोर र अप्ठ्यारो वातावरणमा बाँच्न सक्छन् र सही वृद्धि अवस्थाहरू सामना गर्दा मात्र सक्रिय हुन्छन्।

१.२.२ भाइरस संक्रमण
भाइरसहरू माइक्रोस्कोपिक संक्रामक एजेन्टहरू हुन् जसले प्रजननका लागि होस्ट सेलको मेसिनरीहरू लिन्छ।तिनीहरूको अत्यन्त सानो आकारले तिनीहरूलाई संस्कृतिमा पत्ता लगाउन र सेल संस्कृति प्रयोगशालाहरूमा प्रयोग हुने अभिकर्मकहरूबाट हटाउन गाह्रो बनाउँछ।धेरै जसो भाइरसहरूसँग तिनीहरूको होस्टहरूको लागि धेरै कडा आवश्यकताहरू हुन्छन्, तिनीहरूले प्राय: होस्ट बाहेक अन्य प्रजातिहरूको सेल संस्कृतिहरूलाई प्रतिकूल असर गर्दैनन्।
यद्यपि, भाइरस-संक्रमित सेल कल्चरहरूको प्रयोगले प्रयोगशालाका कर्मचारीहरूको स्वास्थ्यमा गम्भीर जोखिम निम्त्याउन सक्छ, विशेष गरी यदि मानव वा प्राइमेट कोशिकाहरू प्रयोगशालामा हुर्किएका छन्।

सेल कल्चरहरूमा भाइरल संक्रमण इलेक्ट्रोन माइक्रोस्कोपी, एन्टिबडीहरूको सेटको साथ इम्युनोस्टेनिङ, ELISA, वा PCR उपयुक्त भाइरल प्राइमरहरूद्वारा पत्ता लगाउन सकिन्छ।

1.3 माइकोप्लाज्मा प्रदूषण
Mycoplasmas सेल पर्खाल बिना साधारण ब्याक्टेरिया हो, र तिनीहरूलाई सबैभन्दा सानो आत्म-प्रतिकृति जीवहरू मानिन्छ।तिनीहरूको अत्यन्त सानो आकारको कारण (सामान्यतया 1 माइक्रोन भन्दा कम), माइकोप्लाज्मा पत्ता लगाउन गाह्रो हुन्छ जबसम्म तिनीहरू अत्यन्त उच्च घनत्वमा पुग्छन् र कोशिका संस्कृतिहरू बिग्रन्छन्।तब सम्म, सामान्यतया संक्रमण को कुनै स्पष्ट संकेत छैन।

1.3.1 माइकोप्लाज्मा प्रदूषण को पहिचान
केही ढिलो-बढ्दो माइकोप्लाज्माहरू कोशिकाको मृत्यु नगरी संस्कृतिहरूमा रहन सक्छन्, तर तिनीहरूले संस्कृतिहरूमा होस्ट कोशिकाहरूको व्यवहार र चयापचयलाई परिवर्तन गर्छन्।

क्रोनिक माइकोप्लाज्मा संक्रमण कोशिकाको प्रसार दरमा कमी, संतृप्ति घनत्व कम र निलम्बन संस्कृतिमा एग्ग्लुटिनेशन द्वारा विशेषता हुन सक्छ।
यद्यपि, माइकोप्लाज्मा प्रदूषण पत्ता लगाउने एक मात्र भरपर्दो तरिका भनेको फ्लोरोसेन्ट स्टेनिङ (जस्तै, Hoechst 33258), ELISA, PCR, इम्युनोस्टेनिङ, अटोरेडियोग्राफी, वा माइक्रोबियल परीक्षण प्रयोग गरी नियमित रूपमा संस्कृति परीक्षण गर्नु हो।

1.4 खमीर प्रदूषण
यीस्टहरू फंगल साम्राज्यको एकल-कोशिका युकेरियोटहरू हुन्, जसको आकार केही माइक्रोन (सामान्यतया) देखि ४० माइक्रोन (विरलै) सम्म हुन्छ।

1.4.1 खमीर प्रदूषण को पहिचान
ब्याक्टेरियल प्रदूषणको रूपमा, खमीरले दूषित संस्कृतिहरू बादल हुन सक्छ, विशेष गरी यदि प्रदूषण उन्नत चरणमा छ।खमीरले दूषित कल्चरहरूको pH धेरै कम परिवर्तन हुन्छ जब सम्म प्रदुषण अझ गम्भीर हुँदैन, जुन चरणमा pH सामान्यतया बढ्छ।माइक्रोस्कोप अन्तर्गत, खमीर व्यक्तिगत अंडाकार वा गोलाकार कणहरूको रूपमा देखिन्छ र साना कणहरू उत्पादन गर्न सक्छ।

2. क्रस संक्रमण
यद्यपि माइक्रोबियल प्रदूषण जत्तिकै सामान्य छैन, HeLa र अन्य द्रुत-बढ्दो सेल लाइनहरूसँग धेरै सेल लाइनहरूको व्यापक क्रस-प्रदूषण गम्भीर परिणामहरूको साथ स्पष्ट रूपमा परिभाषित समस्या हो।सम्मानित सेल बैंकहरूबाट सेल लाइनहरू प्राप्त गर्नुहोस्, नियमित रूपमा सेल लाइनहरूको विशेषताहरू जाँच गर्नुहोस्, र राम्रो एसेप्टिक प्रविधिहरू प्रयोग गर्नुहोस्।यी अभ्यासहरूले तपाईंलाई क्रस-प्रदूषणबाट बच्न मद्दत गर्नेछ।डीएनए फिंगरप्रिन्टिङ, क्यारियोटाइपिङ र आइसोटाइपिङले तपाईंको सेल संस्कृतिमा क्रस-प्रदूषण छ कि छैन भनेर पुष्टि गर्न सक्छ।

यद्यपि माइक्रोबियल प्रदूषण जत्तिकै सामान्य छैन, HeLa र अन्य द्रुत-बढ्दो सेल लाइनहरूसँग धेरै सेल लाइनहरूको व्यापक क्रस-प्रदूषण गम्भीर परिणामहरूको साथ स्पष्ट रूपमा परिभाषित समस्या हो।सम्मानित सेल बैंकहरूबाट सेल लाइनहरू प्राप्त गर्नुहोस्, नियमित रूपमा सेल लाइनहरूको विशेषताहरू जाँच गर्नुहोस्, र राम्रो एसेप्टिक प्रविधिहरू प्रयोग गर्नुहोस्।यी अभ्यासहरूले तपाईंलाई क्रस-प्रदूषणबाट बच्न मद्दत गर्नेछ।डीएनए फिंगरप्रिन्टिङ, क्यारियोटाइपिङ र आइसोटाइपिङले तपाईंको सेल संस्कृतिमा क्रस-प्रदूषण छ कि छैन भनेर पुष्टि गर्न सक्छ।