सेल संस्कृति वातावरणले कोशिका उत्पादनलाई असर गर्छ

सेल कल्चरको मुख्य फाइदाहरू मध्ये एक भनेको कोशिका प्रजनन (जस्तै तापक्रम, पीएच, ओस्मोटिक दबाव, O2 र CO2 तनाव) र शारीरिक वातावरण (जस्तै हर्मोन र पोषक तत्व एकाग्रता) को भौतिक रसायनलाई हेरफेर गर्ने क्षमता हो।तापमानको अतिरिक्त, संस्कृति वातावरण विकास माध्यम द्वारा नियन्त्रित छ।

यद्यपि संस्कृतिको भौतिक वातावरण यसको भौतिक र रासायनिक वातावरण जत्तिकै स्पष्ट छैन, सीरम कम्पोनेन्टहरूको राम्रो बुझाइ, विस्तारको लागि आवश्यक वृद्धि कारकहरूको पहिचान, र संस्कृतिमा कोशिकाहरूको सूक्ष्म वातावरणको राम्रो बुझाइ।(जस्तै सेल-सेल अन्तरक्रिया, ग्यास प्रसार, म्याट्रिक्स संग अन्तरक्रिया) अब केहि सेल लाइनहरु सीरम-मुक्त मिडिया मा कल्चर गर्न अनुमति दिन्छ।

1. संस्कृति वातावरणले कोशिकाको वृद्धिलाई असर गर्छ
कृपया ध्यान दिनुहोस् कि सेल कल्चर अवस्थाहरू प्रत्येक सेल प्रकारका लागि फरक हुन्छन्।
एक विशेष सेल प्रकारको लागि आवश्यक संस्कृति अवस्थाहरूबाट विचलनको परिणामहरू असामान्य फेनोटाइपहरूको अभिव्यक्तिदेखि सेल संस्कृतिको पूर्ण विफलतासम्म।त्यसकारण, हामी तपाईंलाई आफ्नो रुचिको सेल लाइनसँग परिचित हुन सिफारिस गर्छौं र तपाईंले आफ्नो प्रयोगमा प्रयोग गर्ने प्रत्येक उत्पादनको लागि प्रदान गरिएका निर्देशनहरूलाई कडाईका साथ पालना गर्नुहोस्।

2. तपाइँको कोशिकाहरु को लागी एक अनुकूलित सेल संस्कृति वातावरण बनाउन को लागी सावधानीहरु:
संस्कृति मिडिया र सीरम (थप जानकारीको लागि तल हेर्नुहोस्)
pH र CO2 स्तरहरू (थप जानकारीको लागि तल हेर्नुहोस्)
प्लास्टिक खेती गर्नुहोस् (थप जानकारीको लागि तल हेर्नुहोस्)
तापक्रम (थप जानकारीको लागि तल हेर्नुहोस्)

2.1 सांस्कृतिक मिडिया र सीरम
संस्कृति माध्यम संस्कृति वातावरणको सबैभन्दा महत्त्वपूर्ण भाग हो, किनकि यसले कोशिकाको वृद्धिको लागि आवश्यक पोषक तत्व, वृद्धि कारक र हार्मोनहरू प्रदान गर्दछ, र संस्कृतिको pH र ओस्मोटिक दबाबलाई विनियमित गर्दछ।

यद्यपि प्रारम्भिक सेल कल्चर प्रयोगहरू तन्तुको अर्क र शरीरको तरल पदार्थबाट प्राप्त प्राकृतिक मिडिया प्रयोग गरेर प्रदर्शन गरिएको थियो, मानकीकरणको आवश्यकता, मिडिया गुणस्तर, र बढ्दो मागले निश्चित मिडियाको विकासको नेतृत्व गर्यो।मिडियाका तीन आधारभूत प्रकारहरू बेसल मिडिया, कम सीरम मिडिया र सीरम-मुक्त मिडिया हुन्, र तिनीहरूसँग सीरम पूरकताका लागि फरक आवश्यकताहरू छन्।

२.१.१ आधारभूत माध्यम
Gibco सेल संस्कृति माध्यम
धेरैजसो सेल लाइनहरू एमिनो एसिड, भिटामिन, अकार्बनिक लवण, र कार्बन स्रोतहरू (जस्तै ग्लुकोज) भएको आधारभूत मिडियामा राम्रोसँग बढ्छन्, तर यी आधारभूत मिडिया सूत्रहरू सीरमसँग पूरक हुनुपर्छ।

2.1.2 घटाइएको सीरम माध्यम
गिब्को कम सीरम माध्यमको साथ बोतल
सेल कल्चर प्रयोगहरूमा सीरमको प्रतिकूल प्रभावहरू कम गर्न अर्को रणनीति सीरम-कम मिडिया प्रयोग गर्नु हो।घटाइएको सीरम माध्यम पोषक तत्व र पशु-व्युत्पन्न कारकहरूमा धनी आधारभूत माध्यम सूत्र हो, जसले आवश्यक सीरमको मात्रा घटाउन सक्छ।

2.1.3 सीरम-मुक्त माध्यम
Gibco सीरम-मुक्त माध्यमको साथ बोतल
सीरम-मुक्त माध्यम (SFM) उपयुक्त पोषण र हर्मोन ढाँचाको साथ सीरम प्रतिस्थापन गरेर पशु सीरमको प्रयोगलाई रोक्छ।धेरै प्राथमिक संस्कृतिहरू र सेल लाइनहरूमा सीरम-मुक्त मध्यम सूत्रहरू छन्, जसमा चिनियाँ ह्याम्स्टर ओभरी (CHO) पुनः संयोजक प्रोटीन उत्पादन लाइन, विभिन्न हाइब्रिडोमा सेल लाइनहरू, कीट रेखाहरू Sf9 र Sf21 (Spodoptera frugiperda), साथै भाइरस उत्पादनका लागि होस्टका लागि। (उदाहरणका लागि, 293, VERO, MDCK, MDBK), आदि। सीरम-रहित माध्यम प्रयोग गर्ने मुख्य फाइदाहरू मध्ये एक भनेको वृद्धि कारकहरूको उपयुक्त संयोजन चयन गरेर विशिष्ट सेल प्रकारहरूको लागि मध्यम चयन गर्ने क्षमता हो।निम्न तालिकाले सीरम-मुक्त मिडियाका फाइदाहरू र हानिहरू सूचीबद्ध गर्दछ।

फाइदा
स्पष्टता बढाउनुहोस्
थप लगातार प्रदर्शन
सजिलो शुद्धीकरण र डाउनस्ट्रीम प्रशोधन
सेल प्रकार्यको सही मूल्यांकन गर्नुहोस्
उत्पादकत्व बढाउनुहोस्
शारीरिक प्रतिक्रियाहरूको राम्रो नियन्त्रण
परिष्कृत सेल मिडिया पत्ता लगाउने
बेफाइदा
सेल प्रकार विशिष्ट मध्यम सूत्र आवश्यकताहरू
उच्च अभिकर्मक शुद्धता चाहिन्छ
वृद्धिमा सुस्तता

2.2.1 pH स्तर
धेरैजसो सामान्य स्तनधारी सेल लाइनहरू pH 7.4 मा राम्रोसँग बढ्छन्, र विभिन्न सेल लाइनहरू बीचको भिन्नताहरू सानो हुन्छन्।यद्यपि, केही रूपान्तरित सेल लाइनहरू थोरै अम्लीय वातावरण (pH 7.0 - 7.4) मा राम्रोसँग बढ्न देखाइएको छ, जबकि केही सामान्य फाइब्रोब्लास्ट सेल लाइनहरूले थोरै क्षारीय वातावरण (pH 7.4 - 7.7) लाई प्राथमिकता दिन्छ।कीट सेल लाइनहरू जस्तै Sf9 र Sf21 pH 6.2 मा राम्रोसँग बढ्छ।

2.2.2 CO2 स्तर
विकास माध्यमले संस्कृतिको pH नियन्त्रण गर्दछ र pH मा परिवर्तनहरूको प्रतिरोध गर्न संस्कृतिमा कोशिकाहरूलाई बफर गर्दछ।सामान्यतया, यो बफरिङ जैविक (उदाहरणका लागि, HEPES) वा CO2-bicarbonate-आधारित बफरहरू समावेश गरेर प्राप्त गरिन्छ।किनभने माध्यमको pH घुलनशील कार्बन डाइअक्साइड (CO2) र बाइकार्बोनेट (HCO3-) को नाजुक सन्तुलनमा निर्भर गर्दछ, वायुमण्डलीय CO2 मा परिवर्तनहरूले माध्यमको pH परिवर्तन गर्नेछ।तसर्थ, CO2-bicarbonate-आधारित बफरको साथ बफर गरिएको माध्यम प्रयोग गर्दा, exogenous CO2 को प्रयोग गर्न आवश्यक छ, विशेष गरी जब खुला संस्कृति भाँडामा कोशिकाहरू कल्चर गर्दा वा उच्च सांद्रतामा रूपान्तरित सेल लाइनहरू संस्कृति गर्दा।यद्यपि अधिकांश शोधकर्ताहरूले सामान्यतया हावामा 5-7% CO2 प्रयोग गर्छन्, प्रायः सेल कल्चर प्रयोगहरूले सामान्यतया 4-10% CO2 प्रयोग गर्छन्।यद्यपि, सही pH र ओस्मोटिक दबाव प्राप्त गर्न प्रत्येक माध्यममा सिफारिस गरिएको CO2 तनाव र बाइकार्बोनेट एकाग्रता हुन्छ;थप जानकारीको लागि, कृपया मध्यम निर्माताका निर्देशनहरू हेर्नुहोस्।

2.3 प्लास्टिक खेती
सेल कल्चर प्लास्टिकहरू विभिन्न प्रकार, आकार र सतहहरूमा विभिन्न सेल संस्कृति अनुप्रयोगहरू अनुरूप उपलब्ध छन्।सेल कल्चर प्लाष्टिक सरफेस गाइड र सेल कल्चर कन्टेनर गाइड प्रयोग गर्नुहोस् तपाईको सेल कल्चर अनुप्रयोगको लागि सही प्लास्टिक छनोट गर्न मद्दत गर्न।
सबै थर्मो वैज्ञानिक Nunc सेल संस्कृति प्लास्टिक हेर्नुहोस् (विज्ञापन लिङ्क)

2.4 तापक्रम
कोशिका संस्कृतिको लागि इष्टतम तापक्रम धेरै हदसम्म होस्टको शरीरको तापक्रममा निर्भर गर्दछ जहाँबाट कोशिकाहरू पृथक हुन्छन्, र कम हदसम्म तापमानमा हुने शारीरिक परिवर्तनहरूमा (उदाहरणका लागि, छालाको तापक्रम कंकालको मांसपेशीको भन्दा कम हुन सक्छ। )।सेल कल्चरको लागि, ओभर तताउने भन्दा बढी तातो हुनु एक गम्भीर समस्या हो।तसर्थ, इनक्यूबेटरमा तापक्रम सामान्यतया इष्टतम तापक्रम भन्दा थोरै कम हुन्छ।

2.4.1 विभिन्न सेल लाइनहरूको लागि इष्टतम तापमान
धेरैजसो मानव र स्तनधारी कोशिका रेखाहरूलाई अधिकतम वृद्धिको लागि ३६°C देखि ३७°C मा राखिन्छ।
इष्टतम वृद्धिको लागि कीट कोशिकाहरू 27 डिग्री सेल्सियसमा खेती गरिन्छ;तिनीहरू कम तापक्रममा र 27°C र 30°C बीचको तापक्रममा बिस्तारै बढ्छन्।30 डिग्री सेल्सियस भन्दा माथि, कीट कोशिकाहरूको जीवन शक्ति घट्छ, यदि यो 27 डिग्री सेल्सियसमा फर्कियो भने, कोशिकाहरू रिकभर हुँदैनन्।
एभियन सेल लाइनहरू अधिकतम वृद्धिमा पुग्न 38.5 डिग्री सेल्सियस चाहिन्छ।यद्यपि यी कोशिकाहरूलाई 37 डिग्री सेल्सियसमा राख्न सकिन्छ, तिनीहरू अझ बिस्तारै बढ्नेछन्।
चिसो रगत भएका जनावरहरू (जस्तै उभयचर, चिसो पानीको माछा) बाट प्राप्त सेल लाइनहरूले 15°C देखि 26°C सम्मको फराकिलो तापमानको दायरा सहन सक्छ।